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HS Probe qPCR Mix (P2201-P2202-P2203-P2204-P2205)

促销: 480.00~28800.00
运费 ¥20.00
P2201(1ml) P2202(1mlx5) P2203(1mlx10) P2204(1mlx50) P2205(1ml×100)

HS Probe qPCR Mix

Cat. #P2201P2202P2203P2204P2205

产品简介

HS Probe qPCR Mix用于探针法实时定量PCR2×浓缩预混液,使用时只需加入模板引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶配合东盛特制的Real Time PCR Buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的PCR反应。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配TaqMan等各类荧光探针使用,与常见定量PCR仪完美兼容,如ABIRocheBio-Rad等。

产品组成

Component

P2201

P2202

P2203

P2204

P2205

2× HS Probe qPCR Mixa

1 ml

1 ml×5

1 ml×10

1 ml×50

1 ml×100

超纯水

1 ml

1 ml×5

-

-

-

a 包含Hotstart Taq DNA聚合酶,AptamerdNTP及反应缓冲液等。

保存条件

HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配制以下反应体系:

Component

Volume

Final concentration

DNA template[1]

1-4 μl

Variable

Forward primer (10 μM)[2]

0.4 μl

0.2 μM

Reverse primer (10 μM)

0.4 μl

0.2 μM

2× HS Probe qPCR Mix

10 μl

1×

Probe (10 μM)[3]

Variable

0.1-0.5 μM

ddH2O

Variable

-

Total volume[4]

20 μl

-

[1] DNA模板建议用量(20 μl体系):1-10 ng cDNA,或10-100 ng gDNA。加样体积不宜过小,以免造成较大的误差,但未稀释的cDNA不宜超过总体积的1/10。因此模板建议浓度(加样前):cDNA 1-10 ng/μlgDNA 10-100 ng/μl

[2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μM, 通常引物终浓度为0.2 μM效果较好

[3] 使用探针的浓度与Real Time PCR扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μM之间。

[4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。

注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加ROX才能精确测定Ct值。由于ROX的使用体积较小,建议将ROX提前与qPCR Mix混匀使用。ROX用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。

Instruments

ROX (100X)

ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700

1-2% (High ROX)

ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000

0.2% (Low ROX)

Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler

No ROX

2. 设定反应程序进行qPCR反应

步法程序示例如下:

Stage

Temperature

Time

Cycle

Initial denaturation

95

3 min

1

Denaturation

95

10 sec

40

Annealing & Extension[1]

60

30 sec

[1] 仪器在此阶段进行信号采集,某些仪器要求时间在30秒以上,请根据仪器类型设置,如ABI 7300至少31秒,ABI 7500至少34秒。如需优化温度,建议在55-65范围内调整。

若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。

经典三步法程序示例如下:

Stage

Temperature

Time

Cycle

Initial denaturation

95

3 min

1

Denaturation

95

10 sec

40

Annealing

60[1]

15 sec

Extension[2]

72

20 sec

[1] 常用退火温度在55-65℃之间。退火温度一般设定为所用引物的Tm-5℃,若低于55℃,则以Tm值为退火温度,一般不低于55℃

[2] 仪器在此阶段进行信号采集,某些仪器要求时间在30秒以上,请根据仪器类型设置,如ABI 7300至少31秒,ABI 7500至少34秒。

3. 分析结果

观察扩增曲线;调整基线,计算Ct值;进行相对或绝对定量。

注意事项

? 使用前Mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4

? 将(n+x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n1/10

? ABI的定量仪器大部分需要ROX校正管间差异,Bio-Rad的定量仪器不需要ROX校正。具体仪器请参照其使用说明。

? 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测。可瞬时离心去除气泡。

 引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μM-1.0 μM——特异性较差时减少引物用量,或以3为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。

? DNA模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。

? 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量

 

相关产品

名称

货号

规格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高纯度质粒小提试剂盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

通用RNA提取试剂盒

R1051

50

基因组DNA快速提取试剂盒

N1111/N1112

50/100

DNA凝胶回收试剂盒

N1071/N1072/N1073

50/100/200

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20/100


 


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